Антинуклеарный фактор (HEp-2)

Метод исследования с применением эпителиальных клеток человека - HEp-2, который дает возможность выявления антинуклеарных антител, рассматриваемых в качестве одного из маркеров так называемых системных заболеваний соединительной ткани.

Выявление антинуклеарного фактора (или АНФ) является своего рода "золотым стандартом" обнаружения антинуклеарных антител (или АНА) и распознавания аутоиммунных заболеваний.

Патогенетические механизмы системных заболеваний соединительной ткани (или СЗСТ) коррелируют с нарушениями в функционировании иммунной системы организма и усиленной выработкой антител в отношении структур собственных клеток. Так называемые аутоантитела в отношении компонентов клеточного ядра - антинуклеарные антитела - вступают во взаимодействие с нуклеиновыми кислотами, белками ядра, цитоплазматическими антигенами, что приводит к воспалительным изменениями в различных тканях, органах, к болям в мышцах и суставах, к кожными изменениям, потере веса, выраженному утомлению. Антинуклеарные антитела выявляются при многих заболеваниях аутоиммунной природы, однако наиболее типичны при системной красной волчанке (или СКВ). АНА регистрируются у более чем 90% лиц, имеющих СЗСТ; на сегодняшний день описано порядка 200 разновидностей, объединяемых единым названием "антинуклеарный фактор".

При выявлении антинуклеарного фактора методом непрямой флюоресценции более часто применяется перевиваемая линия эпителиоцитов аденокарциномы гортани человека (или НЕр-2). Ее клетки являются весьма удобным субстратом при лабораторном исследовании, поскольку обладают сравнительно крупными ядрами, а также растут в один слой на стеклах. Антинуклеарный фактор обнаруживается при образовании связи с внутриклеточными антигенами НЕр-2-клеток.

При исследовании НЕр-2-клетки выращивают на стеклах, подвергают фиксации и инкубируют с разведенной сывороткой крови больного. После удаления лишней сыворотки клетки инкубируются с антителами, меченными флюоресцеином, поле чего вновь промываются и затем исследуются с применением флюоресцентного микроскопа, с определением при этом титра антител, а также типа свечения. Значимым в диагностическом отношении принимается титр более 1:160. В случае обострения ревматических заболеваний титр превышает 1:640, при ремиссии понижается до диапазона 1:160-1:320. С увеличением количества антител титр также повышается. Тип свечения дает возможность установления мишеней антинуклеарных антител; это важно с клинической точки зрения и может определять тактику для дальнейшего обследования больного. Выделяют различные типы окрашивания ядра (например периферический, гранулярный, ядрышковый, центромерный, цитоплазматический). 

Для каждого типа свечения имеются весьма характерные признаки, позволяющие отличать их друг от друга.

Гомогенное окрашивание (диффузное) связано с присутствием антител в отношении двуспиральной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), гистонов и присуще системной красной и лекарственной волчанке.

Периферическое свечение обусловливается периферическим распределением в ядре хроматина, связано с антителами в отношении дезоксирибонуклеиновой кислоты, специфично для системной красной волчанки. Этот тип свечения важно отличать от окрашивания мембраны ядра, которое имеет место при аутоиммунных патологиях печени.

Гранулярное окрашивание обнаруживается наиболее часто, является наименее специфичным, встречается при многих заболеваниях аутоиммунной природы. Аутоантигены в данном случае - нуклеопротеиновые комплексы в составе ядра (Sm, U1-RNP и некоторые другие).

Весьма высокие титры антинуклеарного фактора с крупногранулярным типом свечения свидетельствуют часто о смешанном заболевании соединительной ткани.

Нуклеарное (или ядрышковое) окрашивание обусловливается образованием антител в отношении компонентов ядрышка (например PHК-полимераза-1, NOR, некоторые другие); обнаруживается в случае склеродермии, при болезни Шегрена. Образование антинуклеарных антител в ряде случаев увеличивается при некоторых эндокринных патологиях (например при сахарном диабете первого типа, воспалении щитовидной железы, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), при поражениях кожи (пузырчатке, псориазе), при беременности, после пересадки тканей и органов, у лиц на гемодиализе.

Центромерное свечение обнаруживается при наличии антител в отношении центромер хромосом; характерно для определенной формы склеродермии - так называемого CREST-синдрома.

Цитоплазматический тип свечения. Он связан с антителами в отношении тРНК-синтетазы, встречается при дерматомиозите, полимиозите. Этот тип окрашивания выявляется также при наличии антител в отношении иных компонентов цитоплазмы в случае аутоиммунного гепатита, при первичном билиарном циррозе.

Обнаружение различных типов свечения в одно и то же время говорит о наличии различных видов антител.

При исследовании здоровых лиц может выявляться мелкогранулярное свечение в случае низких, умеренных или же высоких титров антинуклеарных антител, однако крупнозернистые или же гомогенные типы свечения выявляться не должны.

После оценки типа свечения определяется дальнейшая тактика лечения, могут проводиться дополнительные исследования, позволяющие уточнить спектр антинуклеарных антител.

За 30 минут до взятия крови прекращается курение.

Приведены лишь некоторые процессы, состояния и заболевания, при которых целесообразно назначение данного анализа.

Исследование на антинуклеарный фактор (HEp-2) может проводиться для выявления системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ); с целью диагностического разграничения ревматических заболеваний; для оценки эффективности проводимого лечения аутоиммунных заболеваний; с целью наблюдения за течением СЗСТ.

Ниже приведены лишь некоторые возможные процессы, состояния и заболевания, при которых обнаруживается антинуклеарный фактор (HEp-2). Следует помнить, что результат исследования может не всегда являться достаточно специфичным и достаточным критерием для формирования заключения. Представленная информация никоим образом не служит целям самодиагностики и самолечения. Окончательный диагноз устанавливается только врачом при сочетании полученных данных с результатами других методов исследования.

Возможные причины повышения титра антинуклеарного фактора: cистемная красная волчанка (СКВ), системная склеродермия, дерматомиозити или полимиозит, смешанное заболевание соединительной ткани (так называемый синдром Шарпа), синдром Шегрена, дискоидная волчанка, синдром Рейно, ревматоидный артрит, лекарственная волчанка, инфекционный мононуклеоз, некротизирующий васкулит, некоторые злокачественные новообразования (например лимфома, лейкоз), инфекционный эндокардит, тяжелая миастения, первичный билиарный цирроз печени, хронический аутоиммунный гепатит, пневмокониоз, интерстициальный фиброз легких, туберкулез.

Факторы, которые могут оказывать влияние на результат исследования

Ложноположительный результат - он может быть  связан со следующими моментами: возраст исследуемого старше 60-65 лет (отмечается в 10-37% всех случаев); применение ряда медикаментов, которые могут обусловливать появление лекарственной волчанки (например тиазидные диуретики, тетрациклин, сульфаниламид, стрептомицин, резерпин, хинидин, пропилурацил, прокаинамид, примидон, фенитоин, фенилбутазон, пенициллин, пероральные контрацептивы, метилдопа, соли лития, изониазид, гидралазин, гризеофульвин, соли золота и ряд других). К ложноотрицательному результату иногда может проводить применение глюкокортикостероидов (например преднизолон, дексаметазон, метипред).

В 5% всех случаев системной красной волчанки возможно получение отрицательного результата исследования (АНФ-отрицательная системная красная волчанка). В таких случаях с целью уточнения диагноза требуется определение антител в отношении SS-антигенов (Ro).

Положительный результат исследования не всегда служит абсолютным свидетельством наличия аутоиммунного заболевания. Так, у ряда здоровых лиц (3-13%) титр антинуклеарного фактора повышен и может достигать 1:320.

Результаты исследования необходимо интерпретировать совместно с клиническими данными, а также с иными лабораторными показателями.

В случае получения положительного результата рекомендовано определение специфичности антинуклеарных антител иммуноблотом.